章文深, 冯彩玲, 林智, 邱春锦, 吴岩斌, 吴建国
为探究广叶绣球菌(Sparassis latifolia)蛋白抗结肠癌活性及潜在作用机制,采用氯化钠浸提结合硫酸铵沉淀法制备广叶绣球菌蛋白(SLSP-50)。用高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-MS/MS)检测SLSP-50主要蛋白质肽段的氨基酸序列,与广叶绣球菌的蛋白质氨基酸序列数据库进行比对,获取主要蛋白质的全氨基酸序列,再通过NCBI平台CD-search工具在线预测其保守结构域。用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)法检测SLSP-50体外对人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制活性,用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色法、流式细胞术和免疫印迹法等检测SLSP-50对HT-29细胞凋亡的影响。结果显示:SLSP-50主要由A、B和C 3种蛋白质组成,蛋白质A为谷氨酸脱羧酶/酪氨酸脱羧酶/磷酸吡哆醛依赖酶,蛋白质B为S53家族蛋白/Pro-kumamolisin,蛋白质C未检索到相关功能域。SLSP-50能显著抑制HT-29细胞增殖,上调HT-29细胞促凋亡蛋白Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2-associated x protein, Bax)、细胞色素C(cytochrome c, Cyt-c)、半胱天冬蛋白酶-3(cysteine-aspartic acid protease-3, Caspase-3)和cleaved-caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)的表达,触发细胞线粒体凋亡,表明SLSP-50具有体外抗结直肠癌活性。研究结果可为广叶绣球菌蛋白作为一种潜在抗结肠癌药物的开发提供参考。