食用菌学报

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本期团队介绍

2020, 36(01): 0.

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线粒体DNA序列多位点分析揭示全球松茸复合种种内有限基因变异和种间稳定区别

SANDOR Sarah R., 王汉臣, VAARIO Lumin, TRUDELL Steven A., 徐建平

2020, 36(01): 1-19. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.001

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松茸是外生菌根真菌，分布在北半球，在温带生态系统的物质循环和改善植物健康中发挥着重要作用。这类食用菌也具有很高的经济价值，尤其在日本。根据形态特征和基于细胞核核糖体RNA基因簇转录间隔区（ITS）序列的DNA条形码，已经把松茸按不同地理区域来源归为几个物种：Tricholoma matsutake（欧亚大陆），T. anatolicum（地中海区域），T. magnivelare（北美东部），T. murrillianum（北美西部）和T. mesoamericanum（墨西哥）。这些物种共同构成全球松茸复合种。本研究通过多位点序列分析进一步调查松茸系统地理学，更深入的理解这种生物的全球分布和进化历史。来自北美、北欧和东亚的42个松茸样品的ITS序列和4个线粒体位点被检测。总体上线粒体DNA多位点系统分析呈现出和ITS系统发育分析一致的模式和拓扑结构，即各个地理区域的样品分别聚在一起。然而，在我们的4个被检测物种的样品间，几乎没有或没有发现所选线粒体位点的基因变异。我们的研究结果表明松茸物种复合体中的线粒体基因组的进化速度较慢，或各个物种的广泛分布源于近期的扩散。深入理解松茸复合种的遗传多样性和演化关系，对制定保护政策有重要意义。

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利用绿色荧光蛋白GFP研究不同启动子在蝉棒束孢菌中的表达活性

李栋, 刘常利, 刘靖宇, 孟俊龙, 王洪凯

2020, 36(01): 20-28. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.002

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利用农杆菌介导转化（Agrobacterium-mediated transformation,ATMT）的方法，将3个来源于蝉棒束孢菌（Isaria cicadae）、2个来源于稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）的启动子在蝉棒束孢菌中驱动绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的表达。通过荧光显微镜观察GFP荧光亮度和荧光定量PCR检测GFP基因的转录水平,比较不同启动子的转录活性，并利用筛选出的高表达活性载体pKD5GFP观察小G蛋白Rho在蝉棒束孢菌中的定位。结果表明:来源于稻瘟病菌的H3启动子在蝉棒束孢菌中对GFP基因具有较高的起始转录功能，小G蛋白Rho在孢子和新生菌丝阶段均有表达。研究结果可为在蝉棒束孢菌中进行外源基因表达和遗传研究提供参考。

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金针菇贮藏保鲜期间表面细菌菌相变化

潘欣圆, 杨娟, 施乐乐, 蔡志英, 李若熙, 陈炳智, 江玉姬

2020, 36(01): 29-35. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.003

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采用传统平板培养法与宏基因组测序法，对4 ℃贮藏保鲜条件下金针菇（Flammulina velutipes）表面细菌数量及种类进行分析。传统平板培养法共分离到3个门6个属的细菌，其中美洲爱文氏菌属和乳酸乳球菌属的细菌在不同贮藏时间均被分离到。宏基因组测序法共分析鉴定出13个门80个属的细菌，主要为厚壁菌门的乳酸乳球菌属和魏斯氏菌属，变形菌门的耶尔森氏菌属。研究表明：4 ℃贮藏条件下，金针菇表面细菌群落结构具有丰富的多样性，随着贮藏时间延长，菌落总数不断增加，而细菌种类数目下降，乳酸乳球菌是金针菇4 ℃贮藏保鲜期间的优势菌。

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木耳属新品种鹿肚耳的生物学特性和驯化

钱可晴, 徐安然, 杨迪, 李晓

2020, 36(01): 36-41. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.004

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对分离纯化自非洲赞比亚的野生皱木耳（Auricularia delicata）的菌株进行生物学特性研究，并首次在我国东北地区进行驯化栽培获得优势菌株，命名为“鹿肚耳”。结果表明：鹿肚耳菌丝生长最适温度为28 ℃，最适pH为6，最适碳源为葡萄糖，最适氮源为酵母浸粉；栽培过程中，培养料含水量为58%~60%，子实体生长最适温度为26 ℃，从接种到采收仅需43 d，产量为每包55～60 g（干重）。本研究将非洲热带地区的皱木耳资源引进我国东北地区，通过驯化栽培获得出菇性状稳定的鹿肚耳菌株，为其进一步工厂化栽培提供了合适的种质资源。

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五株工厂化栽培的黑木耳生理特性比较

陈辉, 郝海波, 赵静, 顾忆龙, 汪虹, 王倩, 陈明杰, 张津京

2020, 36(01): 42-48. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.005

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比较了工厂化栽培的黑木耳(Auricularia auricula)菌株双二、黑单、C10、C6和C3的子实体产量、栽培培养料的酶活性，研究了木质纤维素与产量的关联性，以及子实体中氨基酸的种类及其含量。结果表明：C10菌丝生长速度较快，且子实体产量最高，分别为4.19 mm·d-1和（152.71±5.69）g；C10漆酶活性最高，C6锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶、羧甲基纤维素酶、β-葡萄糖苷酶、β-1,3 葡聚糖酶活性最高，黑单内切-β-1,4-葡聚糖酶活性最高；C10纤维素降解量最多，产量随纤维素和木质素降解量的升高而升高，并且均具有显著相关性，而半纤维素降解量与产量没有相关性；不同菌株木质纤维素的降解程度与其木质纤维素降解酶活性的高低没有一一对应的关系；C6无论是总氨基酸、人体必需的8种氨基酸，还是鲜味、甜味、苦味和无味氨基酸总量都较高。因此，在工厂化栽培条件下，黑木耳C10菌株符合工厂化生产特点，可缩短采收周期，降低生产成本。

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一株野生竹黄菌的鉴定及其萃取发酵产竹红菌甲素发酵条件的优化

胡梦花, 闫晓晓, 黄志贤, 吴振强, 田霄飞

2020, 36(01): 49-62. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.006

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通过内转录间隔区测序和序列比对的方法，对1株高产竹红菌甲素（hypocrellin A，HA）的菌株进行分子鉴定；以HA得率为目标，对种子液培养时间、接种量以及发酵产HA的培养基碳氮源进行优化，并对萃取发酵的表面活性剂种类、添加量和时间进行筛选和优化。通过形态和荧光染色观察，研究菌丝体形态、细胞膜成分和活性氧分布对萃取发酵的响应。结果表明：该菌株属于竹黄菌，命名为Shiraia bambusicola（GDMCC 60438）。在实验范围内，以10 g·L^-1甘油、4 g·L^-1马铃薯浸出粉和12 g·L^-1牛肉膏为培养基，经72 h液态发酵，单位碳源HA生物转化率（得率）达到13.98 mg·g^-1。在1%~10%（V∶V）范围内，增加接种量可以提升HA得率。Triton X -100为萃取发酵的优选表面活性剂。与常规发酵相比，在第70小时添加0.2％（V∶V）Triton X-100启动萃取发酵，HA的得率提高37.02%，达到了16.70 mg·g^-1碳源。萃取发酵时，菌丝表面发生褶皱，呈现收缩或聚集状态；菌丝体内活性氧得到诱导。

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灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物体外抑制肿瘤细胞增殖的作用

张忠, 张劲松, 唐庆九, 周帅, 杨焱, 冯娜, 王金艳, 刘艳芳

2020, 36(01): 63-68. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.007

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采用磷酸盐法对灵芝 (Ganoderma lucidum) β-葡聚糖进行磷酸化修饰，在不同反应温度下（60、70、80、90、100 ℃）得到灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物（PGLP1~5），随着反应温度的上升，衍生物取代度（degree of substitution, DS）逐渐增大，重均分子量（average molecular weight, M_w）逐渐下降，反应温度为100 ℃时取代度最大为1.02。灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物体外对肿瘤细胞K562和L1210的增殖均有抑制作用，随着取代度增加，抑制率增高，且呈浓度依赖性；取代度最大的磷酸化衍生物PGLP5（DS = 1.02，M_w = 0.8×10⁴）在200 μg·mL^-1浓度下，对K562和L1210细胞增殖的抑制率分别为58.74%和50.05%，其IC₅₀值分别为99.61 μg·mL^-1和187.52 μg·mL^-1。研究结果表明，灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物具有体外抗肿瘤活性，且抗肿瘤活性强弱与其取代度大小有关，取代度越大，抗肿瘤活性越强。

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九种食用菌子实体多糖对水稻幼苗生长的影响

肖文斐, 倪深, 阮松林, 陈惠哲, 忻雅, 裘劼人, 柴伟国

2020, 36(01): 69-74. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.008

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采用水提醇沉法分别提取灰树花（Grifola frondosa）、毛头鬼伞（Coprinus comatus）、柱状田头菇（Agrocybe aegerita）、刺芹侧耳（Pleurotus eryngii）、香菇（Lentinula edodes）、草菇（Volvariella volvacea）、小孢鳞伞（Pholiota microspora）、猴头菌（Hericium erinaceus）和皱环球盖菇（Stropharia rugosoannulata）子实体的水溶性多糖，以不添加多糖的琼脂培养基为对照组，将杂交水稻种子分别播种于含有9种食用菌子实体多糖的琼脂培养基及对照组培养基中，使多糖在培养基中的终浓度为100 mg·L^{-1^{。当种子培养至第10天，分别测量幼苗株高和根长，记录叶龄和根数，测定苗和根的干重，以及第二叶的叶绿素含量和根系的活力。结果表明：添加9种食用菌子实体多糖的培养基培养的水稻幼苗株高和苗干重，与对照组相比，组间差异均具有统计学意义；与对照组相比，除毛头鬼伞子实体多糖外，其他8种多糖均可促进水稻幼苗根的生长，但这9种多糖对水稻幼苗的叶龄和根数无显著性影响；当培养基中添加小孢鳞伞子实体多糖后水稻幼苗第二叶的叶绿素含量为3.2 mg·g^{-1^{，与对照组相比，小孢鳞伞、皱环球盖菇、灰树花、毛头鬼伞和猴头菌子实体多糖对水稻幼苗第二叶的叶绿素含量有显著性影响，而柱状田头菇、刺芹侧耳、香菇和草菇子实体多糖无显著性影响；与对照组相比，当培养基中添加皱环球盖菇子实体多糖时，对水稻幼苗的根系活力有显著影响，活力值为207.8 U·g^{-1^{·h^{-1^{，对其他8种多糖无显著影响，添加香菇子实体多糖后根系活力值只有43.8 U·g^{-1^{·h^{-1^。}}}}}}}}}}}

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十七种食药用菌提取物抗病毒活性筛选

蔡超, 雷苏炜, 陈少丹, 谢意珍, 潘鸿辉, 王弋

2020, 36(01): 75-84. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.009

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通过MTT法和空斑实验法评价了17种食药用菌提取物对单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus 1，HSV-1）和肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）的两个不同来源毒株EV71-CSFI4、EV71-PTPS的抑制效果。结果表明：皱盖假芝（Amauroder marudis）、枣翘鳞肉齿菌（Sarcodon imbricatus）水提物对3种病毒均具有较好的抑制效果，皱盖假芝水提物对HSV-1、 EV71-CSFI4、EV7-PTPS的治疗指数分别为32.17、30.05、21.55；枣翘鳞肉齿菌水提物对EV71-CSFI4、EV71-PTPS的治疗指数较高，分别为95.35、112.22。研究结果提示皱盖假芝、枣翘鳞肉齿菌水提物具有进一步开发抗病毒产品的潜力。

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广叶绣球菌子实体细胞壁多糖特征及其体外激活Dectin-1受体活性

张雪梦, 颜梦秋, 李德顺, 唐庆九, 张劲松, 杨焱, 周帅, 刘艳芳

2020, 36(01): 85-91. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.010

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广叶绣球菌（Sparassis latifolia）子实体水提残渣经超微粉碎、热水提取、20%~90%乙醇逐级沉淀获得8个细胞壁多糖组分（20E、30E、40E、50E、60E、70E、80E和90E），对其得率、多糖含量、β-葡聚糖含量、分子量分布特征、单糖组成、体外免疫活性进行测定。结果表明：广叶绣球菌水提残渣超微粉水提物得率为20.80%，其多糖含量为78.16%；水提物经乙醇逐级沉淀所得组分中，20E的得率最高，占提取物总量的27.16%，其多糖和β-葡聚糖含量分别为82.58%和35.54%；其余各组分得率和β-葡聚糖含量均较低，其中30E、40E、50E、60E这4个组分的多糖含量较高，均达到80%以上，而70E、80E、90E的多糖含量为26.36%~52.55%。利用高效凝胶尺寸排阻色谱多角度激光散射示差折光检测仪联用法（HPSEC-MALLS-RI）对20E、30E、40E、50E、60E的分析结果显示，20E主要含有2个峰，其重均分子量分别为1.47×10⁷和5.06×10⁶；30E、40E、50E和60E组分均主要含有1个均一对称峰，且随着醇沉浓度的增加，其重均分子量逐级减小。单糖组成分析结果显示：20E、30E、40E、50E、60E中的多糖均主要由葡萄糖组成，另外还含有少量半乳糖、岩藻糖和甘露糖，葡萄糖的摩尔百分比均超过80%。20E、30E、40E、50E、60E都具有体外激活Dectin-1受体的活性，其中20E的活性最高。

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冬生多孔菌液体培养菌丝体提取物抗氧化活性

程野, 王一菲, 于晓丹, 田雪梅, 陆思, 周丽伟

2020, 36(01): 92-96. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.011

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以忍冬桑黄（Sanghuangporus lonicericola）、栎生桑黄（S. quercicola）液体培养菌丝体的无水乙醇、乙酸乙酯提取物和阳性试剂为对照，测定了冬生多孔菌(Polyporus brumalis)液体培养菌丝体的无水乙醇、乙酸乙酯提取物对DPPH、ABTS自由基的清除能力。菌丝体提取物对DPPH、ABTS自由基清除能力的IC₅₀值表明：对DPPH自由基的清除能力，冬生多孔菌、栎生桑黄菌丝体的无水乙醇、乙酸乙酯提取物差异不显著，但显著强于忍冬桑黄提取物和阳性对照试剂TBHQ、BHT；对ABTS自由基的清除能力，冬生多孔菌无水乙醇提取物比两种桑黄提取物弱，其乙酸乙酯提取物比忍冬桑黄提取物弱，与栎生桑黄提取物差异不显著，但显著强于水溶性维生素E。本研究首次报道了冬生多孔菌具有抗氧化活性，为其药用功能的开发提供参考。

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食用菌细菌性病害研究进展

隋昆澎, 田龙, 宋冰, 李玉

2020, 36(01): 97-104. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.012

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随着食用菌产业规模的不断扩大，细菌性病害成为阻碍食用菌产业快速发展的一个严重问题。目前，细菌性病害多发生于蘑菇属、侧耳属、金针菇、草菇和香菇等食用菌上，笔者介绍了国内外食用菌细菌性病害的研究进展，总结了食用菌细菌性病害的发病症状、病原菌的类型及鉴定方法、病害的防治方法，为食用菌细菌性病害的防治和深入研究提供参考。

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根癌农杆菌介导的食用菌遗传转化研究进展

查丽燕, 周伟坚, 王越, 张振伟, 文华枢, 莫美华

2020, 36(01): 105-118. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2020.01.013

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对根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化的机制和已成功应用的食用菌种类、转化的具体过程以及影响转化效率的因素等方面进行综述，总结目前农杆菌介导转化法在食用菌基因功能和外源蛋白表达上的应用，分析农杆菌介导食用菌构建随机插入突变体库等方面的问题，并对食用菌无筛选标记遗传转化的应用前景进行展望，以期为食用菌的转基因研究和工程菌株育种提供参考。

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