食用菌学报

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基于CRISPR/Cas9技术研究金针菇冷诱导结实基因HK1和HK2的编辑转化系统

欧阳萍兰, 李琼洁, 郭丽琼, 林俊芳, 叶志伟, 魏韬, 郑倩望, 伍土恒, 罗润

2018, 25(03): 1-7. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.001

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对金针菇(Flammulina velutipes)冷诱导相关的组氨酸激酶基因HK1和HK2构建了基因组编辑(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表达载体,探索了金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度,利用PEG介导的方法将表达载体pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA转化金针菇原生质体,经潮霉素筛选后的拟转化子再进行PCR鉴定。结果显示:金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度均为50μg/mL;经潮霉素筛选后的部分拟转化子成功扩增出Cas9的部分片段,携带有HK1、HK2基因载体的Cas9蛋白基因成功整合到了金针菇的基因组中,两个表达载体转化率分别为24.1%和12.5%。

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三株野生重伞灵芝的鉴定及其多糖、三萜含量分析

解凡, 叶丽云, 赵丽丽, 汤坤鹏, 吴小平

2018, 25(03): 8-14. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.002

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采用形态鉴定、ITS鉴定和ITS-RFLP分子标记方法对采集自福建的3株野生灵芝进行鉴定,并将其生物学特性及化学成分与赤芝(Ganoderma lingzhi)菌株ZK进行比较。结果表明:采集的3株野生灵芝为重伞灵芝(G.multipileum)。与赤芝菌株ZK相比,3株野生重伞灵芝菌株LQ、LJ和Y1菌丝生长速度快(P<0.01),LQ、LJ、Y1最适生长温度分别为32、32、34℃,均高于赤芝ZK;供试菌株均偏好酸性生长环境;重伞灵芝LQ和Y1的产量分别为每袋(12.1±1.3)、(11.7±0.9)g,达到ZK产量(17.6±1.8)g的66%以上。Y1与LQ的子实体多糖含量分别为(12.9±0.1)、(10.7±0.3)mg/g,高于赤芝ZK的子实体多糖含量(9.2±0.2)mg/g(P<0.01);LJ、Y1的三萜含量约为7.5mg/g,LQ的三萜含量为(6.5±0.3)mg/g,分别是ZK三萜含量的84.27%和73.03%。从HPLC图谱可知重伞灵芝有许多赤芝没有的峰,三萜酸的种类比较丰富。?

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基于基因组解析不同香菇菌株木质纤维素降解酶体系的差异

杨瑞恒, 李焱, 吴莹莹, 唐利华, 尚俊军, 鲍大鹏

2018, 25(03): 15-22. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.003

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通过比较香菇(Lentinula edodes)野生菌株L3,NCBI已公布的菌株135A、135B、B17、NBRC 111202、W1-26,木腐菌金针菇(Flammulina velutipes)、糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus),以及草腐菌双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、灰盖鬼伞(Coprinopsis cinerea)、草菇(Volvariella volvacea)的基因组。结果表明:香菇不同菌株间基因组存在较大差异,大小为36.69~46.11 Mb,基因数量为11192~14889;香菇菌株135A、135B、B17、L3、NBRC 111202和W1-26基因组注释的碳水化合物活性酶(carbohydrate-active enzymes,CAZymes)基因数量分别为520、520、483、475、524和537,其中L3最少,为475;纤维素酶在香菇不同菌株中基因数量为19~22,低于灰盖鬼伞和草菇,高于双孢蘑菇;不同香菇菌株的氧化还原酶基因数量为41~55,L3最少,为41,NBRC111202最多,为55,135A和135B最为接近。在基因水平上,木腐菌与草腐菌的木质纤维素降解酶体系没有完全的界限,它们之间存在一定的共性,因此木腐菌草腐化栽培存在可能性。

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覆土层益生菌恶臭假单胞菌TK3对双孢蘑菇的促生作用

王琳, 魏启舜, 周影, 赵荷娟, 陈悦, 李辉信, 郭成宝,

2018, 25(03): 23-29. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.004

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为研究恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)TK3对双孢蘑菇(Agaricus bisporus)的促生作用,用红色荧光蛋白rfp基因标记菌株TK3,获得的转化子TK3(rfp)在紫外光照射下发出红色荧光,且转入的rfp基因未对TK3细胞产生毒性。将TK3(rfp)与双孢蘑菇菌丝进行共培养,发现TK3(rfp)可促进双孢蘑菇菌丝的生长并促进菌丝扭结成团。在覆土层中喷施TK3(rfp)菌液,20d后覆土层中细菌总数和TK3(rfp)数量随着TK3(rfp)喷施量的增加而增加,说明TK3(rfp)能在覆土层中定殖,当喷施浓度为每克覆土107cfu时,与对照相比,双孢蘑菇子实体产量增加24.9%。?

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红托竹荪母种菌丝生长特性及胞外酶活性

李利梅, 朱国胜, 黄万兵, 卢颖颖, 龚光禄, 张丽娜, 杨通静, 桂阳

2018, 25(03): 30-35. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.005

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采用木屑培养基培养红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)母种90d,培养过程中观察测定菌丝生长特性,从第40天开始测定5种胞外酶活性。结果表明:漆酶(laccase)和纤维素酶(cellulase,CL)活性较高,漆酶活性为31.2~52.7U/mL,CL活性为10.7~31.9U/mL;中性木聚糖酶(neutral xylanase,NEX)活性较低,为0.2~0.4U/mL;多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)和过氧化物酶(peroxidase,POD)活性分别为3.3~11.7U/mL和2.5~13.5U/mL。线性相关分析表明:母种菌丝生长状态、生长速度和胞外酶活性有相关性,菌丝变红程度与漆酶活性呈显著负相关,与POD活性呈极显著负相关,漆酶活性与生长速度呈显著正相关。?

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采用几丁质和麦角固醇测定双孢蘑菇W192栽培种相对菌丝量的方法研究

曾辉, 曾志恒, 舒黎黎, 程翊, 戴建清, 李玉

2018, 25(03): 36-41. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.006

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采用分光光度法建立几丁质和麦角固醇标准品的标准曲线,对双孢蘑菇(Agaricus bisporus)W192液体发酵菌丝的2种细胞组分(几丁质和麦角固醇)进行测定,建立了双孢蘑菇W192中几丁质和麦角固醇含量与菌丝量的标准曲线。根据该标准曲线,对双孢蘑菇W192麦粒栽培种的几丁质和麦角固醇含量以及相对菌丝量进行了研究。结果表明:不同质量浓度的几丁质和麦角固醇标准品分别与吸光度值之间具有良好的线性关系,决定系数R2分别达到0.9991和0.9996;W192菌丝体中的几丁质和麦角固醇质量浓度分别与菌丝体质量之间也具有较好的线性关系,决定系数R2均达到0.9991;双孢蘑菇W192液体发酵纯菌丝(7d菌龄)的几丁质和麦角固醇含量分别为121.93、6.145μg/mg;两种方法测定的双孢蘑菇W192麦粒栽培种(15d菌龄)的相对菌丝量分别为120.8mg/g(基于几丁质计算)和139.2mg/g(基于麦角固醇计算),并且2种方法均测出双孢蘑菇麦粒栽培种麦麸中的菌丝量超过胚乳中菌丝量的20~40倍。?

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弱磁场对樟芝液态发酵菌丝体细胞膜流动性的影响

郭丹钊, 赵杨, 葛璐, 马海乐, 李振江

2018, 25(03): 42-48. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.007

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采用荧光偏振法测定弱磁场对樟芝(Taiwanofungus camphoratus)ATCC 200183菌丝体细胞膜流动性的影响。以1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(1,6-dipheny-1,3,5-hexatriene,DPH)作为荧光探针标记樟芝菌丝体细胞膜,优化DPH荧光标记条件,测定不同弱磁场强度(30、60、90、120mT和180mT)下菌丝体细胞膜荧光各向异性及荧光偏振度的变化。结果表明,DPH标记细胞膜激发波长和发射波长分别324nm和453nm,DPH最佳标记温度和时间分别为30℃和45min;磁场强度为30mT时,菌丝体细胞膜荧光偏振度、荧光各向异性与对照组(未粘贴铷铁硼磁片)相比差异不显著(P>0.05);磁场强度为60、90、120mT和180mT时,菌丝体细胞膜荧光偏振度、荧光各向异性显著低于对照组(P<0.05);90、120、180mT处理组间差异不显著(P>0.05)。在供试弱磁场强度下,菌丝体生物量的变化趋势与细胞膜流动性变化趋势相似,在磁场强度为90mT时菌丝体生物量达到最大值(4.230g/L),显著高于不加磁场的对照处理(3.119g/L)。

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富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠的影响

谭许朋, 梁慧嘉, 恽昊, 杨永善, 焦春伟, 谢意珍

2018, 25(03): 49-55. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.008

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将60只雄性昆明小鼠随机分为6组:正常对照组、模型对照组、别嘌呤醇组、蛹虫草(Cordyceps militaris)组、富硒蛹虫草低剂量组和富硒蛹虫草高剂量组。采用次黄嘌呤灌胃联合氧嗪酸钾腹腔注射诱导小鼠构建高尿酸血症模型,测定降尿酸与抗氧化能力相关指标,探讨富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血尿酸含量与抗氧化能力的影响。结果表明:与模型对照组相比,富硒蛹虫草低、高剂量组血清尿酸含量显著下降,分别为(384.00±144.27)μmoL/L和(363.32±150.56)μmoL/L,血清总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平均显著上升,同时血清丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量均显著下降;富硒蛹虫草高剂量组肝脏谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量与SOD水平均显著升高,富硒蛹虫草低、高剂量组肝脏MDA含量均显著降低。因此,富硒蛹虫草不仅对高尿酸血症小鼠具有良好的降尿酸作用,而且能够增加其机体的抗氧化能力。?

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粉碎细度对灵芝子实体水提物中多糖组成和体外免疫活性的影响

刘艳芳, 唐庆九, 张劲松, 王晨光, 杨焱, 周帅, 吴迪, 张忠, 崔武卫

2018, 25(03): 56-62. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.009

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采用普通机械粉碎和超微粉碎法获得子实体碎块(1.0cm×0.5cm)和不同细度(10~200目)的灵芝(Ganoderma lucidum)子实体粉,对其提取物得率、多糖含量、相对分子质量分布特征、单糖组成及体外免疫活性等进行了系统比较分析。结果表明,实验范围内,随子实体粉细度增加,提取物的得率和多糖含量也提高,相对分子质量为2×10~6~3.5×10~6的多糖组分在提取物中所占比例增加。与子实体碎块相比,当粉体达到100目时,水提物总得率从6.41%提高到7.89%,增加了23.1%;而30%乙醇沉淀部分得率由原来的0.67%升高到2%以上,提高了2倍。单糖组成分析结果显示,30%乙醇沉淀的大分子多糖(30E)主要为葡聚糖,70%乙醇沉淀多糖(70E)主要含有半乳糖和葡萄糖,另外还含有少量的岩藻糖、甘露糖和葡萄糖醛酸,增加粉碎细度对70E部分的单糖组成没有显著影响。与70E部分相比,30E部分均表现出较好的刺激巨噬细胞释放NO的活性。?

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灵芝-何首乌双向液体发酵菌质抗氧化活性研究

辛燕花, 张铁丹, 张建华, 连广平

2018, 25(03): 63-71. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.010

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采用单因素实验的方法,考察何首乌(Polygoni multiflori)添加量、何首乌添加时间、液体培养基初始pH,发酵时间对何首乌-灵芝(Ganoderma lucidum)双向液体发酵菌质抗氧化活性的影响,基于单因素实验结果,对以上因素进行正交实验优化,并对最优发酵条件下获得的何首乌-灵芝双向液体发酵菌质中3种活性成分(多糖、总黄酮和三萜)含量进行测定。结果表明:何首乌-灵芝双向液体发酵最佳条件为于发酵第3天添加何首乌0.15g/30mL、液体培养基初始pH 8.0、发酵时间9d;在此条件下,发酵菌质的还原力达到0.72,是对照灵芝菌丝体(未添加何首乌)的4.5倍;活性物质多糖、三萜、总黄酮含量分别为187.32、60.88、20.74mg/g,是对照的1.98、1.54和3.23倍。因此,通过何首乌-灵芝双向液体发酵获得较高抗氧化活性菌质是可行的。?

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灵芝孢子、子实体和菌丝体的抗氧化活性比较

蔡梦婷, 唐庆九, 王益莉, 黄怡雯, 冯杰, 冯娜, 俞苓

2018, 25(03): 72-76. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.011

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为探讨灵芝(Ganoderma lucidum)孢子、子实体和菌丝体的抗氧化活性差异,对同一菌种的3种样品进行水提、不同溶剂(石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水)依次提取和醇沉分级,运用化学发光法分别测定其抗氧化能力。结果发现:菌丝体水提液对过氧化氢的清除能力最强,在1mg/mL浓度下清除率达80.2%,子实体水提液对羟基自由基的清除能力最强,在1mg/mL浓度下清除率达到62.9%。不同溶剂依次提取所得提取液中,孢子粉的乙酸乙酯提取液对羟基自由基清除率较高,达到35.6%;乙醇提取液对过氧化氢的清除率较高,达到17.2%。子实体的水溶性部分对羟基自由基和过氧化氢的清除率较高,分别为40.0%和56.2%;菌丝体的水溶性部分对羟基自由基和过氧化氢的清除率较高,分别为34.4%和71.1%;就抗氧化活性而言,三种样品乙醇沉淀部分远远低于上清液,因此上清液是抗氧化的主要部分。?

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不同温度和食用菌寄主对罗宾根螨生长发育的影响

骆昕, 曲绍轩, 马林, 李辉平, 蒋宁, 侯立娟, 林金盛

2018, 25(03): 77-81. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.012

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观测罗宾根螨(Rhizoglyphus robini)在不同温度(12、15、18、22、25、28、31、34、37、40、43℃)下在不同食药用菌寄主[秀珍菇(Pleurotus pulmonarius)、糙皮侧耳(P.ostreatus)、鲍鱼菇(P.abalonus)、金针菇(Flammulina velutipes)、灵芝(Ganoderma lucidum)、双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、茶树菇(Agrocybe cylindracea)、毛木耳(Auricularia polytricha)、香菇(Lentinula edodes)]上的发育历期、发育起点温度及有效积温。结果表明,在实验温度范围内,罗宾根螨的发育历期随着温度的升高而先缩短后延长,在25~31℃时发育历期较短,而在12、43℃时,卵无法正常孵化均不能完成生活史;在最适温度下,罗宾根螨在香菇(申香215)上的发育总历期最短,为(9.45±1.83)d,在秀珍菇(台秀)上最长,为(13.37±1.83)d。寄主与温度双因素方差分析显示,温度是罗宾根螨生长过程中的重要影响因素。罗宾根螨在供试食用菌寄主上的发育起点温度为16.89~20.89℃,有效积温为99.68~153.91日度。?

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紫顶子银盘的学名考证

刘虹, 董淑英, 李素玲, 祁海萍, 许晶, 杨杰, 郝秀丽

2018, 25(03): 82-85. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.013

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紫顶子银盘是山西管涔山当地山民传统食用的野生蘑菇之一,但紫顶子银盘没有对应的学术名称,本研究对其进行形态学特征和ITS分析,证实紫顶子银盘的学名为烟云杯伞(Clitocybe nebularis)。

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丝膜菌属真菌研究进展

李敏, 姚庆智, 魏杰, 闫伟

2018, 25(03): 86-95. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.014

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丝膜菌属(Cortinarius)真菌物种丰富,本文从丝膜菌属的生态和经济价值、资源和分类学研究以及活性成分研究等几个方面论述了该属的研究进展,并讨论了未来的研究方向。?

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食药用菌抗神经炎症的研究进展

汪雯翰, 刘肖肖, 贾薇, 张赫男, 杨焱, 吴迪, 谭怡, 唐传红, 颜梦秋, 刘艳芳, 张劲松,

2018, 25(03): 96-102. https://doi.org/10.16488/j.cnki.1005-9873.2018.03.015

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神经胶质细胞和神经元是神经系统两大细胞种类,其中神经胶质细胞占神经系统细胞总数的70%。越来越多的研究证明,由神经胶质细胞介导的神经炎症是神经退行性疾病如阿茨海默症发病的重要因素之一,因而抑制脑部神经炎症,有益于神经退行性疾病的预防与治疗。近年来的一些研究表明源于食药用菌的多糖、核苷、甾醇、萜类等活性物质,能够通过抑制脑内胶质细胞激活,表现出良好的抗神经炎的活性,其活性作用机制涉及到抑制TNF-α和IL-1β等促炎性细胞因子释放,增加IL-10等抗炎症因子的产生等。根据近年的文献报道,本文总结了食药用菌在抗神经炎症的活性成分及作用机制等方面的研究进展,为从食药用菌中筛选出抗神经炎症和治疗神经退行性疾病的大健康产品提供参考。?

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